Окраски спор по ожешко

Метод окраски по Нейссеру

Окраски спор по ожешко

1. Фиксированный мазок окрашивают уксуснокислой синей 4 мин, затем сливают краску.

2. Промывают водой и наливают раствор Люголя на 20-30 сек.

3. Не промывая водой, окрашивают везувином 1-3 мин.

4. Промывают водой, высушивают.

Тела бактерий окрашиваются в нежный светло-коричневый цвет, зерна волютина — в темно-синий, почти черный цвет.

Нуклеоид

Нуклеоид – ядерный аппарат бактерий. Представлен молекулой ДНК, соответствующей одной хромосоме. Она циркулярно замкнута, располагается в ядерной вакуоле, не имеет ограничивающей от цитоплазмы мембраны и митотического аппарата.

С ДНК связано небольшое количество РНК и РНК-полимеразы. ДНК свернуто вокруг центрального стержня, состоящего из РНК и представляет собой высокоупорядоченную компактную структуру.

Хромосомы большинства прокариот имеют молекулярную массу в пределах 1-3х109, константу седиментации 1300-2000 S. Молекула ДНК включает 1,6х107 нуклеотидных пар.

Различия в генетическом аппарате прокариотных и эукариотных клеток обуславливает его название: у первых – нуклеоид (образование подобное ядру), в отличие от ядра у вторых.

В нуклеоиде бактерий содержится основная наследственная информация, которая реализуется в синтезе специфических белковых молекул. С ДНК бактериальной клетки связаны системы репликации, репарации, транскрипции и трансляции.

Нуклеоид в прокариотной клетке может быть выявлен в окрашенных препаратах с помощью светового или фазово-контрастного микроскопа. Для окрашивания ядерного вещества используется краситель Фельгена, который специфически окрашивает ДНК.

Метод окраски ДНК по Фельгену

1. Мазок из культуры бактерий фиксируют 2-3 мин метиловым спиртом и помещают в холодную 1% HCl на 1 мин.

2. Подвергают гидролизу при 600С в 1% HCl 5-10 мин и споласкивают дистиллированной водой.

3. Помещают мазок в реактив Шиффа на 40-60 мин, промывают в водопроводной воде 2 мин.

В результате взаимодействия свободных альдегидных групп с бесцветной фуксинсернистой кислотой появляется фиолетовая окраска, свойственная основному фуксину.

У многих бактерий в цитоплазме обнаружены внехромосомные генетические элементы – плазмиды. Они представляют собой замкнутые в кольца двухцепочечные ДНК, состоящие из 1500-40 000 пар нуклеотидов и содержащие до 100 генов.

Плазмиды могут существовать в клетке и в интегрированном состоянии с бактериальной хромосомой, сохраняя при этом способность переходить к автономии.

Капсула

Капсула – слизистый слой клеточной стенки бактерий, состоящий из полисахаридов (пневмококк) или полипептидов (бацилла сибирской язвы).

Микрокапсулу (толщиной менее 0,2 мкм) способны формировать большинство бактерий, четко выраженную макрокапсулу (толщиной более 0,2 мкм) формируют пневмококк, клебсиеллы, возбудитель сибирской язвы и некоторые другие.

У патогенных бактерий капсула образуется в макроорганизме, на искусственных питательных средах она обычно утрачивается (за исключением клебсиелл).

В организме человека и животных капсула защищает патогенные бактерии от бактериофага, фагоцитоза и гуморальных факторов иммунитета, определяет антигенную специфичность микроорганизмов.

Капсулы, имея консистенцию геля, плохо удерживают краситель, и для их выявления чаще всего применяют методы негативного контрастирования.

Метод выявления капсулы по Бурри-Гинса

1. На середину предметного стекла наносят каплю черной туши и смешивают ее с помощью петли с каплей культуры капсульных бактерий.

2. Краем другого предметного стекла делают мазок по типу кровяного. Мазок сушат на воздухе и фиксируют в пламени горелки.

3. Окрашивают 5 мин карболовым фуксином, разведенным водой 1:3.

4. Осторожно промывают водой, высушивают.

Бактерии окрашиваются в красный цвет, неокрашенные капсулы контрастно выделяются на темном фоне препарата.

Жгутики

Жгутики выполняют роль органа движения, позволяющего бактериям передвигаться со скоростью 20-60 мкм/сек. Бактерии могут иметь один (монотрихи) или несколько жгутиков, располагающихся по всей поверхности тела (перитрихи), либо собранные в пучки (лофотрихи).

Перитрихиальное расположение жгутиков характерно для энтеробактерий, возбудителей анаэробной инфекции, столбняка, ботулизма; монотрихом является холерный вибрион, лофотрихом — псевдомонас. У некоторых видов спирилл различают амфитрихиальное расположение жгутиков. Толщина жгутиков в среднем составляет 10-30 нм, а длина достигает 10-20 мкм.

Основу жгутика составляет длинная спиральная нить (фибрилла), которая у поверхности клеточной стенки переходит в утолщенную изогнутую структуру- крюк и прикрепляется к базальной грануле, вмонтированной в клеточную стенку и ЦПМ (рис. 10).

Базальные гранулы имеют диаметр около 40 нм и состоят из нескольких колец (одна пара у грамположительных бактерий, четыре — у грамотрицательных прокариот). Удаление пептидогликанового слоя клеточной стенки ведет к потере способности бактерий к движению, хотя жгутики при этом остаются неповрежденными.

Рис. 10. Схематическая модель базального конца жгутика Е. coli, основанная на электронных микрофотографиях выделенной органеллы (Стейниер Р. и др., 1979).

Жгутики почти полностью состоят из белка флагеллина с некоторым содержанием углеводов и РНК.

Под микроскопом жгутики можно увидеть лишь после специальных методов протравливания и импрегнации солями серебра и ртути с последующей окраской метиленовой синью (метод Леффлера).

При этом необходимо учитывать, что жгутики очень чувствительны к различным механическим воздействиям.

О наличии жгутиков можно косвенно судить по направленному характеру движения в «висячей» и «раздавленной» капле в темнопольном и фазово-контрастном микроскопах, либо при светлопольной микроскопии при опущенном конденсоре и частично прикрытой диафрагме микроскопа.

Окраска жгутиков методом Леффлера

В основе выявления жгутиков лежит осаждение на них красителя, чем достигается увеличение толщины жгутиков и уменьшение их прозрачности.

1. Препарат готовят из 16-18 часовой культуры, которую вносят в 1-2 мл стерильной водопроводной воды до получения тонкой опалесцирующей взвеси.

2. Через 20 мин капля суспензии наносят на поверхность чистого обезжиренного стекла и высушивают на воздухе.

3. Обрабатывают в течение 15 мин протравой следующего состава: 1 мл насыщенного спиртового раствора основного фуксина, 10 мл 25% водного раствора таннина, 5 мл насыщенного водного раствора сернокислого железа.

4. Препарат промывают водой.

5. Окрашивают карболовым фуксином Циля, разведенным водой в соотношении 1:1, в течение 5 мин при легком подогревании.

6. Промывают водой, высушивают.

При микроскопии готового препарата жгутики видны как тонкие нитевидные структуры.

Ворсинки (фимбрии, пили)

Поверхность энтеробактерий и нескольких других микроорганизмов покрыта большим числом (от 10 до нескольких тысяч) ворсинок – нитевидных образований белковой природы. Как и жгутики, они построены из одного вида белка – пилина, субъединицы которого организованны в виде полой внутри нити и берут начало от ЦПМ. Они короче и тоньше жгутиков, их ширина 10-12 нм и длина до 12 мкм.

Ворсинки полифункциональны: обеспечивают трансмиссивную передачу генов (конъюгация), являются рецепторами для фагов, органом прикрепления бактерий к питательному субстрату (адгезия), участвуют в транспорте метаболитов.

У стрептококков имеется наружный слой протеиновых волосков (фимбрий), которые получили название белок М (М-протеин). Этот белок играет важную роль в процессах взаимоотношений бактерий с макроорганизмом.

Споры

Некоторые бактерии в конце периода активного роста способны образовывать споры. Этому предшествует обеднение среды питательными веществами, изменение ее рН, накопление ядовитых продуктов метаболизма. Как правило, одна бактериальная клетка образует одну спору – локализация спор различна (центральная, терминальная, субтерминальная) (рис. 11).

Pис. 11. Типичные формы спорообразующих клеток. 1. Спора расположена в центре; материнская клетка не увеличена (Bacillus megaterium). 2. Спора расположена терминально, материнская клетка не увеличена; заметны белковые включения (Bacillus thuringiensis). 3. Спора расположена терминально, материнская клетка раздута в форме булавы (Bacillus polymyxa). 4.

Спора расположена в центре; материнская клетка деформирована и приобрела форму веретена — клостридиальная форма (Bacillus polymyxa). 5. Спора расположена терминально; круглая материнская клетка имеет форму барабанной палочки — плектридиальная форма (Bacillus sphaericus). 6.

Спора расположена латерально; материнская клетка приобрела веретенообразную форму (Bacillus laterosporus) (Шлегель Г., 1987).

Если размеры спор не превышают поперечного размера палочковидной бактерии, то последняя называется бациллой (возбудитель сибирской язвы).

Когда диаметр споры больше – бактерии имеют форму веретена и носят название клостридий (возбудители анаэробной инфекции). Клостридии столбняка имеют круглую спору и напоминают барабанные палочки.

Клостридии ботулизма отличаются большими овальными спорами, что придает им вид теннисной ракетки.

По химическому составу различие спор от вегетативных клеток состоит лишь в количественном содержании химических соединений. Споры содержат меньше воды и больше липидов.

Формирование спор связано с уплотнением и обособлением определенного участка цитоплазмы вегетативной клетки с последующим образованием внутри бактерии круглого или овального тельца, покрытого плотной многослойной оболочкой, которая пропитана большим количеством липидов, кальция, дипиколиновой кислоты (рис. 12).

Рис. 12. Схема образования споры. А и Б. Образование септы. В и Г. Окружение протопласта споры протопластом материнской клетки. Д. Образование кортекса и оболочек споры. Е. Схема строения зрелой споры.

1 — экзоспориум; 2 — наружная оболочка споры; 3 — внутренняя оболочка споры; 4 — кортекс; 5 — клеточная стенка зародыша; 6 — цитоплазматическая мембрана; 7 — цитоплазма с ядерным веществом (Шлегель Г., 1987).

После полного созревания споры вегетативная часть клетки может лизироваться. Среди патогенных микробов способностью к спорообразованию обладают только палочковидные грамположительные бактерии. Большинство из них подвижны, благодаря перитрихиально расположенным жгутикам.

В состоянии споры микроорганизмы метаболически неактивны, выдерживают высокую температуру (140°-150°С), воздействие химических дезинфицирующих веществ и длительно сохраняются в окружающей среде. Устойчивость к высокой температуре связана с очень низким содержанием воды и высоким содержанием дипиколиновой кислоты.

Попадая в организм человека и животных, споры прорастают в вегетативные клетки. Процесс прорастания спор включает три стадии: активации, начальной стадии и стадии роста.

К активирующим агентам, нарушающим состояние покоя, относят повышенную температуру, кислую реакцию среды, механические повреждения и др. Спора начинает поглощать воду, освобождается от дипиколата кальция, с помощью гидролитических ферментов разрушает многие собственные структурные компоненты.

После разрушения наружных слоев наступает период формирования вегетативной клетки с активацией биосинтеза, заканчивающейся делением клетки.

Окраску спор производят специальным методом, который включает предварительное прогревание споры, а также воздействие концентрированных растворов красок при высокой температуре.

Метод окраски спор по Ожешко

1. На высушенный мазок наливают 0,5 % раствор хлористоводородной кислоты и подогревают 1-2 мин.

2. Препарат промывают водой и фиксируют над пламенем горелки.

3. Окрашивают по способу Циля-Нильсена.

Споры прочно удерживают карболовый фуксин и окрашиваются в красный цвет, цитоплазма бактерий обесцвечивается 5% серной кислотой и после докрашивания метиленовым синим приобретает синий цвет.

МЕТОДЫ МИКРОСКОПИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

Мельчайшие размеры микроорганизмов обусловливают использование для изучения морфологии бактерий точных оптических приборов – микроскопов. Наиболее часто применяются светлопольная микроскопия, микроскопия в темном поле, фазово-контрастная и люминесцентная микроскопия. Для специальных микробиологических исследований используется электронная микроскопия.

Предыдущая12345678910111213141516Следующая

Дата добавления: 2016-08-07; просмотров: 2229; ЗАКАЗАТЬ НАПИСАНИЕ РАБОТЫ

ПОСМОТРЕТЬ ЕЩЕ:

Источник: https://helpiks.org/8-48475.html

Окраска по методу Ожешко для выявления спор

Окраски спор по ожешко

  1. На высушенный нефиксированный препарат (мазок готовится толстым и на краю стекла) наливают несколько капель 0,5%-ного раствора соляной кислоты и подогревают 1 – 2 мин. над пламенем горелки до закипания, после чего остатки кислоты сливают.

  2. Остывший препарат промывают водой, подсушивают на воздухе и фиксируют на пламени горелки.

  3. Окрашивают карболовым фуксином Циля (фуксин наливают на фильтровальную бумажку) с подогреванием до появления паров.

  4. Обесцвечивают 5%-ным раствором серной кислоты в течение нескольких секунд.

  5. Промывают водой.

  6. Докрашивают синькой Леффлера или 1%-ным водным раствором малахитовой зелени в течение 3 – 5 мин.

Споры, окрашенные фуксином,имеют рубиново-красный цвет, вегетативныетела микробных клеток при докрашиваниисинькой Леффлера – синий цвет, приприменении малахитовой зелени – зеленыйцвет.

Особенности биологиивирусов

Вирусы —мельчайшие микробы, не имеющие клеточногостроения, белоксинтезирующей системы,содержащие только ДНК или РНК. Относятсяк царству Vira.Являясь облигатными внутриклеточнымипаразитами, вирусы размножаются вци­топлазме или ядре клетки.

Они —автономные генетические структуры.Отличаются особым — разобщенным(дисъюнктивным) способом размножения(репродукции): в клетке от­дельносинтезируются нуклеиновые кислотывирусов и их белки, затем происходит ихсборка в вирусные частицы.

Сформированнаявирусная частица называется вирионом.

Морфологию и структурувирусов изучают с помощью элек­тронногомикроскопа, так как их размеры малы исравнимы с толщиной оболочки бактерий.

Формавирионов может быть раз­личной:палочковидной (вирус табачной мозаики),пулевидной (вирус бешенства), сферической(вирусы полиомиели­та, ВИЧ), в видесперматозоида (многие бактериофаги).Различают простоустроенные и сложно устроенные вирусы.

Простые, или безоболочечные,вирусы состоят изнуклеиновой кисло­ты и белковойоболочки, называемой капсидом. Капсидсостоит из повторяющихся морфологическихсубъединиц — капсомеров. Нуклеиноваякислота и капсид взаимодействуют другс другом, образуя нуклеокапсид.

Сложные, или оболочечные,вирусы снаружи капсидаокружены ли-попротеиновой оболочкой(суперкапсидом, или пеплосом). Этаоболоч­ка является производнойструктурой от мембран вирус-инфицированнойклетки. На оболочке вируса расположеныгликопротеиновые ши­пы,или шипики(пепломеры).Под оболочкой некоторых вирусовнахо­дится матриксный М-белок.

Тип симметрии.Капсидилинуклеокапсидмогутиметь спираль­ный, икосаэдрический(кубический) или слож­ный тип симметрии.

Икосаэдрическийтипсим­метрии обусловлен образованиемизометричес­ки полого тела из капсида,содержащего вирус­ную нуклеиновуюкислоту (например, у вирусов гепатитаА, герпеса, полиомиелита).

Спираль­ныйтипсимметрии обусловлен винтообразнойструктурой нуклеокапсида (например, увируса гриппа).

Включения —скопление вирионов или отдельных ихкомпонентов в цитоплазме или ядреклеток, выяв­ляемые под микроскопомпри специальном окрашива­нии. Вируснатуральной оспы образует цитоплазмати-ческиевключения — тельца Гварниери; вирусыгерпеса и аденовирусы — внутриядерныевключения.

Размерывирусов определяют с помощью электронноймик­роскопии, методом ультрафильтрациичерез фильтры с извест­ным диаметромпор, методом ультрацентрифугирования.Одним из самых мелких вирусов являетсявирус полиомиелита (около 20 нм), наиболеекрупным — натуральной оспы (около 350нм).

Вирусы имеют уникальныйгеном, так как содержатлибо ДНК, либо РНК. Поэтому различаютДНК-содержащие и РНК-содержащие вирусы.Они обычно гаплоидны, т.е. име­ют одиннабор генов. Геном вирусов представленразличными видами нуклеиновых кислот:двунитчатыми, однонитчатыми, линейными,кольцевыми, фрагментированными.

СредиРНК-содержащих вирусов различают вирусыс положительным (плюс-нить РНК) геномом.Плюс-нить РНК этих вирусов выполняетнаследственную функцию и функциюинформационной РНК (иРНК). Имеются такжеРНК-содержащие вирусы с отрицатель­ным(минус-нить РНК) геномом.

Минус-нить РНКэтих виру­сов выполняет тольконаследственную функцию.

Вирусы поражаютпозвоночных и беспозвоночных животных,а также растения и бактерии.

Являясьосновными возбудителя­ми инфекционныхзаболеваний человека, вирусы такжеучаствуют в процессах канцерогенеза,могут передаваться различными пу­тями,в том числе через плаценту (вирускраснухи, цитомегаловирус и др.

), поражаяплод человека. Они могут приводить кпостинфекционным осложнениям — развитиюмиокардитов, пан­креатитов,иммунодефицитов и др.

Кроме обычных вирусов,известны и так называемые нека­ноническиевирусы — прионы — белковые инфекционныеча­стицы, являющиеся агентами белковойприроды, имеющие вид фибрилл размером10—20×100—200 нм.

Прионы, по-видимому, являютсяодновременно индукторами и продуктамиавтономно­го гена человека илиживотного и вызывают у них энцефалопа­тиив условиях медленной вирусной инфекции(болезни Крейтц-фельдта—Якоба, куру идр.).

Другими необычнымиагентами, близкими квирусам, явля­ются вироиды — небольшиемолекулы кольцевой, суперспи-рализованнойРНК, не содержащие белка, вызывающиезабо­левания у растений.

Структура и химическийсостав вирусов и бактериофагов

Вирусы —мельчайшие микробы, не имеющие клеточногостроения, белоксинтезирующей системы,содержащие только ДНК или РНК. Относятсяк царству Vira.Являясь облигатными внутриклеточнымипаразитами, вирусы размножаются вци­топлазме или ядре клетки.

Они —автономные генетические структуры.Отличаются особым — разобщенным(дисъюнктивным) способом размножения(репродукции): в клетке от­дельносинтезируются нуклеиновые кислотывирусов и их белки, затем происходит ихсборка в вирусные частицы.

Сформированнаявирусная частица называется вирионом.

Морфологию и структурувирусов изучают с помощью элек­тронногомикроскопа, так как их размеры малы исравнимы с толщиной оболочки бактерий.

Формавирионов может быть раз­личной:палочковидной (вирус табачной мозаики),пулевидной (вирус бешенства), сферической(вирусы полиомиели­та, ВИЧ), в видесперматозоида (многие бактериофаги).Различают простоустроенные и сложно устроенные вирусы.

Простые, или безоболочечные,вирусы состоят изнуклеиновой кисло­ты и белковойоболочки, называемой капсидом. Капсидсостоит из повторяющихся морфологическихсубъединиц — капсомеров. Нуклеиноваякислота и капсид взаимодействуют другс другом, образуя нуклеокапсид.

Сложные, или оболочечные,вирусы снаружи капсидаокружены ли-попротеиновой оболочкой(суперкапсидом, или пеплосом). Этаоболоч­ка является производнойструктурой от мембран вирус-инфицированнойклетки. На оболочке вируса расположеныгликопротеиновые ши­пы,или шипики(пепломеры).Под оболочкой некоторых вирусовнахо­дится матриксный М-белок.

Капсид и суперкапсидзащищают вирионы от влияния окру­жающейсреды, обусловливают избирательноевзаимодействие (адсорбцию) с клетками,определяют антигенные и иммуногенныесвойства вирионов. Внутренние структурывирусов называ­ются сердцевиной.

Тип симметрии.Капсидилинуклеокапсидмогутиметь спираль­ный, икосаэдрический(кубический) или слож­ный тип симметрии.

Икосаэдрическийтипсим­метрии обусловлен образованиемизометричес­ки полого тела из капсида,содержащего вирус­ную нуклеиновуюкислоту (например, у вирусов гепатитаА, герпеса, полиомиелита).

Спираль­ныйтипсимметрии обусловлен винтообразнойструктурой нуклеокапсида (например, увируса гриппа).

Включения —скопление вирионов или отдельных ихкомпонентов в цитоплазме или ядреклеток, выяв­ляемые под микроскопомпри специальном окрашива­нии. Вируснатуральной оспы образует цитоплазмати-ческиевключения — тельца Гварниери; вирусыгерпеса и аденовирусы — внутриядерныевключения.

Размерывирусов определяют с помощью электронноймик­роскопии, методом ультрафильтрациичерез фильтры с извест­ным диаметромпор, методом ультрацентрифугирования.Одним из самых мелких вирусов являетсявирус полиомиелита (около 20 нм), наиболеекрупным — натуральной оспы (около 350нм).

Вирусы имеют уникальныйгеном, так как содержатлибо ДНК, либо РНК. Поэтому различаютДНК-содержащие и РНК-содержащие вирусы.Они обычно гаплоидны, т.е. име­ют одиннабор генов. Геном вирусов представленразличными видами нуклеиновых кислот:двунитчатыми, однонитчатыми, линейными,кольцевыми, фрагментированными.

СредиРНК-содержащих вирусов различают вирусыс положительным (плюс-нить РНК) геномом.Плюс-нить РНК этих вирусов выполняетнаследственную функцию и функциюинформационной РНК (иРНК). Имеются такжеРНК-содержащие вирусы с отрицатель­ным(минус-нить РНК) геномом.

Минус-нить РНКэтих виру­сов выполняет тольконаследственную функцию.

Геномвирусов способен включаться в составгенетического аппарата клетки в видепровируса, проявляя себя генетическимпаразитом клетки. Нуклеиновые кислотынекоторых вирусов (вирусы герпеса идр.) могут находиться в цитоплазмеинфициро­ванных клеток, напоминаяплазмиды.

Источник: https://studfiles.net/preview/4022258/page:3/

Микробиология, вирусология, иммунология: Методические указания для самостоятельной работы и к практическим занятиям для студентов лечебного, педиатрического и стоматологического факультетов. Часть I, страница 4

Окраски спор по ожешко

6. Способ Бури (выявление капсул): на конец предметного стекла наносят каплю туши и петлю исследуемого материала.

Смесь перемешивают петлей и готовятмазок вторым предметным стеклом как мазок из крови. Высушивают навоздухе и, не фиксируя, микроскопируютс иммерсионной системой.

Фон препарата окрашенв темно-дьпмчатый цвет, микробные телаи капсулы не окрашиваются и остаются бесцветными (негативный способ).

7. Способ Боголепова(для выявления капсул): негативный метод, при котором используется2% колларгол, техника приготовления препарата  аналогичная способу Бурри. Фон препарата окрашен вкоричневый цвет, тела микробных клеток окрашены в коричневый цвет, акапсула – в виде светлого ободкавокруг микробной клетки.

8.

Способ Гинса (для выявления капсул):1) по способу Бурри готовят препарат; 2) фиксируют этиловым спиртом 15-20 мин, промы­вают препарат; 3) окрашивают карболовым фуксиномЦиля, разведенным 1:3 в течение 3-5 мин; 4) промывают водой, высушиваюти микроскопируют с иммерсионной системой. Натемном фоне препарата контрастно выделяетсянеокрашенные капсулы, внутри которых находятся бактерии ярко-малинового цвета.

Таблица 3. Отличительные признаки грамположительных играмотрицательных микроорганизмов

ПризнакГрамположительные микробыГрамотрицательные микробы
1Представители прокариот1-шаровидные микробы; за исключением менингококков и гонококков;2-дифтерийные палочки;3-туберкулезные палочки;4-спорообразующие палочки;5-актиномицеты.1-гонококки, менингококки;2-палочковидные микробы (не образующие споры);3-риккетсии;4-хламидии;5-спирохеты;6-микоплазмы.
2Строение клеточной стенки (КС)Однослойная клеточная стенка, состоящая из 6-8 рядов пептидогликана+полиса-харид+тейхоевые кислотыДвухслойная клеточная стенка: внутренний слой – пептидогликан, наружный слой представлен комплексом липополисахаридов (ЛПС), фосфолипидов, белков и липопротеидов
3Строение цитоплазматиче-ской мембраны (ЦПМ)Не связана с КС, имеет многочисленные выросты в цитоплазмуТесно связана с КС, имеет незначительное число выростов в цитоплазму
4Особенности строения жгутикового аппаратаОдна пара колец для закрепления жгутиков на уровне ЦПМДве пары колец: одна расположена на уровне ЦПМ; вторая – на уровне КС
5Спорообразова-ниедаНет
6Токсинообразо-ваниеОбразуют экзотоксиныОбразуют экзо- и содержат эндотоксины (ЛПС)
7Основные антигеныТейхоевые кислотыСоматический О-антиген (ЛПС)
8Действие лизоцима(+) образуют протопласты(-), иногда (+), образуют сферопласты
9Действие пенициллина(+)(-), иногда (+)

9.

Окраскаспор методом Ожешко: нанефиксированный препарат наливают несколько капель 0,5% раствора солянойкислоты и подогревают 1-2 мин над спиртовкой до закипания, остатки кислотысливают; 2) промывают водой, сушат на воздухе и фиксируют в пламени; 3) окрашивают  карболовым фуксином Циля с подогреваниемдо отхождения паров (3-5 мин); 4) обесцвечивают 5% раствором сернойкислоты в течение нескольких секунд и промывают водой; 5) докрашивают метиленовойсинью 3-5 мин. Споры окрашиваются в красный цвет, а вегетативные тела бактерий в синий цвет.

10.

  Окраскаспор методом Ганзена (видоизмененный метод Циль-Нильсена): 1)фиксированный препарат окрашивают карболовым фуксином Циля с подогреванием (подогревают на пламени спиртовкидо  отхождения паров) и охлаждают втечение 2-3 минут, затем промывают водой; 2) обесцвечивают растворомсерной кислоты, погружая 2-3 раза в раствор и тщательно промывают водой; 3) окрашиваютводно-спиртовым раствором метиленового синего 3-5 минут, промывают водой, высушивают, микроскопируют с иммерсией. Спорыокрашиваются в красный цвет, вегетативные клетки – в синий.

11. Окраскабактериального ядра: на предметном столе готовят мазок, высушивают навоздухе и фиксируют парами 2% раствора осмиевой кислоты в течение 2-3 минут.Далее мазок подвергают гидролизу в растворе соляной кислоты при 60°С 2-3 мин инемедленно промывают водой.

Затем мазок заливают 1% раствором формалина на 1,5мин и вновь промывают водой. Окрашивают 0,1-1% раствором основного фуксина 1-2мин, промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют. На розовом фонецитоплазмы выделяется нуклеоид, окрашенный в ярко-малиновый цвет.

12. Окраска стенкибактериальной клетки (метод Гутштейна): 1) препарат фиксируют над огнем ипротравливают в течение 20-30 мин 5% раствором танина; 2) промывают в течение60 сек и окрашивают карбол-фуксином 1-2 мин. Микробы окрашиваются в слабокрасный цвет, а клеточная стенка – в интенсивно красный цвет.

13. «Раздавленнаякапля»: на середину предметногостекла нанести петлей каплю исследуемого материала, накрыть ее покровнымстеклом.

В капле не должно быть пузырьков, жидкость не должна выходить за краястекла. Микроскопируют с иммерсией при опущенном конденсоре.

В поле зрениявидны бактерии, которые, передвигаясь с помощью жгутиков, совершают круговые ивращательные движения, могут пересекать все поле зрения.

14. «Висячая капля»: используют специальныепредметные стекла с углублением (лунка) в центре. Каплю исследуемого материалананосят на середину покровного стекла. Края лунки смазывают вазелином.

Предметное стекло накладывают на покровное так, чтобы капля находилась в центрелунки. Затем стекло осторожно переворачивают и капля свободно свисает в центрегерметически замкнутой полости лунки.

Микроскопируют с иммерсией, наблюдаяподвижность клеток.

Источник: https://vunivere.ru/work15345/page4

Окраска спор

Окраски спор по ожешко
31.01.2014

Кислотоустойчивость является свойством, присущим главным образом патогенным для человека бактериям, например микобактериям, коринебактериям и актиномицетам. В то же время известно, что к роду Corynebacterium принадлежит несколько видов фитопатогенных бактерий.

Поэтому выявление кислотоустойчивости у возбудителей бактериозов у растений представляет определенный интерес. Приводим один из его рецептов. Готовят мазок из культуры бактерий, высушивают и окрашивают при нагревании до появления слабых паров в течение 3–5 мин карболовым фуксином Циля.

Затем промывают в водопроводной воде и обесцвечивают 95%-ным этиловым спиртом, содержащим 3%-ную по объему соляную кислоту до розового цвета. Снова промывают в водопроводной воде и докрашивают щелочным метиленовым синим Леффлера. Промывают в воде, высушивают и исследуют. Кислотоустойчивые бактерии – красные, все остальные – синие.

Споры являются защитным приспособлением бактерий при наступлении неблагоприятных условий существования. Они представляют собой круглые, овальные или элипсоидные образования, размещенные в центре, на конце или ближе к одному из концов клетки, изменяя иногда форму клетки.

При наблюдении за бактериями в живом состоянии их споры можно различить по сильному преломлению света. В связи с особенностями физико-химического состава и наличием плотной малопроницаемой оболочки споры слабо окрашиваются обычными способами.

Поэтому при их окраске применяют вещества, изменяющие структуру оболочки, после чего краска легче проникает и окрашивает их.

Таким образом, все способы окраски спор построены на том принципе, что их сначала протравливают различными химическими веществами – аммиаком, перекисью водорода, едким натром, соляной, серной, салициловой, уксусной и хромовой кислотами, а затем окрашивают при нагревании с последующим обесцвечиванием и дополнительной окраской.

Из многочисленных способов окраски спор мы приведем несколько, наиболее популярных, простых и дающих хорошие результаты.Так как спороносные аэробные бактерии плохо или совсем не образуют спор на средах, богатых аминокислотами, в литературе приведен рецепт среды Тарр, при выращивании на которой получают положительные результаты.

Среда эта следующего состава:
Способ Ожешки. 1. На высушенный нефиксированный препарат наливают 0,5%-ный раствор соляной кислоты и подогревают до выделения паров 1–2 мин. Затем, остудив, сливают кислоту, отмывают водой, сушат на воздухе, фиксируют на пламени.2.

На фиксированный препарат накладывают фильтровальную бумагу, на которую наливают карболовый фуксин Циля и подогревают в течение 1 мин до появления пара. По мере испарения добавляют краску, не давая ей подсохнуть на препарате; затем краску сливают, а препарат промывают водой.3.

Обесцвечивают быстрым погружением в 1,5% -ный раствор кислоты (серной, соляной, азотной, уксусной) или 33%-ный раствор этилового спирта.Время выдержки в кислоте или спирте с целью обесцвечивания зависит от препарата и колеблется от нескольких секунд до нескольких минут. Это время определяют опытным путем, вынимая препарат из кислоты, промывая водой и просматривая его под микроскопом при помощи сильной сухой системы. Вегетативные клетки должны быть почти бесцветными или иметь чуть заметный розовый оттенок.4. Препарат дополнительно окрашивают метиленовой синью в течение 1–2 мин и тщательно промывают водой. Указанным методом споры окрашиваются в яркий рубиново-красный цвет, а вегетативные клетки – в синий или лиловый.

Способ Пешкова. 1. На фиксированный на пламени или спиртформолом мазок наливают метиленовую синь Леффлера и доводят ее до кипения, держа над пламенем горелки, кипятят 15–20 сек.

2. Промывают водой и докрашивают в течение 30 сек 0,5%-ным водным раствором нейтрального красного. Снова промывают, подсушивают и исследуют под масляной иммерсией микроскопа. Споры голубые или синие. Протоплазма вегетативных форм розовая.

Способ Дорнера. 1. Приготовляют в небольшой пробирке в двух-трех каплях дистиллированной воды густую взвесь бактерий.

2. Добавляют равное количество отфильтрованного карболового фуксина Циля.3. Пробирку помещают в кипящую баню на 10 мин и более.4. На предметном или покровном стекле смешивают одну петлю окрашенного материала с одной петлей раствора нигрозина Дорнера (10 г водорастворимого нигрозина растворяют в 100 мл дистиллированной воды и кипятят на водяной бане в течение 30 мин. Затем к раствору добавляют 0,5 мл формалина. Раствор дважды фильтруют).5. Делают очень тонкий мазок и быстро высушивают его на воздухе.

В результате примененной методики споры окрашиваются в красный цвет, вегетативные клетки остаются неокрашенными, фон серый.

Источник: http://agro-archive.ru/metody-issledovaniya/757-okraska-spor.html

Задания для самоподготовки. тестовые задания

Окраски спор по ожешко

Выберите один правильный ответ.

1. ФИКСИРОВАТЬ МАЗОК ИЗ КРОВИ, ПРЕПАРАТ-ОТПЕЧАТОК СЛЕДУЕТ

1) химическим фиксатором

2) водой

3) антибиотиками

4) жаром

2. МАЗОК ИЗ ПЛОТНОГО МАТЕРИАЛА (ИСПРАЖНЕНИЯ) ФИКСИРУЮТ

1) жаром

2) 60% этанолом

3) эфиром

4) водой

3. ФИКСИРОВАТЬ МАЗОК ИЗ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ МИКРОБОВ СЛЕДУЕТ

1) жаром

2) 60% этанолом

3) эфиром

4) ацетоном

4. КРАСИТЕЛЬ, КОТОРЫЙ ПРИМЕНЯЕТСЯ ДЛЯ ОКРАСКИ ПО МЕТОДУ ЛЕФФЛЕРА

1) краска Романовского-Гимза

2) раствор метиленового синего

3) разведенный основной фуксин

4) марганцовокислый калий

5) йод

5. ФИКСАЦИЮ МАЗКОВ ПРОВОДЯТ С ЦЕЛЬЮ

1) прикрепления препарата к стеклу

2) инактивации микробов

3) обеспечения безопасности работы

4) улучшения восприятия красителя микробом

5) все вышеперечисленное

6. КАЧЕСТВО ФИКСАЦИИ МИКРОПРЕПАРАТА, ЕСЛИ ОКРАШЕННЫЕ МИКРООРГАНИЗМЫ ДВИГАЮТСЯ

1) хорошее

2) плохое

3) среднее

4) нет правильного ответа

7. МОРФОЛОГИЯ БАКТЕРИЙ — ЭТО

1) форма особей

2) величина особей

3) взаимное расположение особей

4) все вышеперечисленное

8. ОСНОВНЫЕ МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ГРУППЫ БАКТЕРИЙ

1) шаровидные, палочковидные, извитые, нитевидные

2) спириллы, вибрионы, монококки

3) стрептококки, диплобактерии, спириллы

4) грибы, кокки, простейшие

9. БАКТЕРИИ ПО СВОИМ БИОЛОГИЧЕСКИМ СВОЙСТВАМ ОТНОСЯТСЯ

1) к эукариотам

2) к прокариотам

3) к грибам

4) к простейшим

10. ПРОКАРИОТЫ — ЭТО МИКРОРГАНИЗМЫ, КОТОРЫЕ ИМЕЮТ

1) ядро

2) нуклеоид

3) клеточную стенку

4) цитоплазматическую мембрану

11. СТРУКТУРНЫЙ ЭЛЕМЕНТ, КОТОРЫЙ ОТНОСИТСЯ К НЕПОСТОЯННЫМ ЭЛЕМЕНТАМ БАКТЕРИЙ

1) спора

2) нуклеоид

3) цитоплазма

4) жгутики

5) клеточная стенка

6) цитоплазматическая мембрана

12. ЭЛЕМЕНТ, КОТОРЫЙ ОТНОСИТСЯ ТОЛЬКО К ПОСТОЯННЫМ СТРУКТУРНЫМ ЭЛЕМЕНТАМ БАКТЕРИЙ

1) спора

2) капсула

3) нуклеоид

4) зерна волютина

13. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РАЗМЕРОВ МИКРООРГАНИЗМОВ

1) центрифугирование с известной скоростью

2) электронная микроскопия

3) измерение величины с помощью окуляр- и объектмикрометра

4) фильтрация через фильтры с известным диаметром пор

5) все вышеперечисленные методы

14. ПРЯМОЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОДВИЖНОСТИ БАКТЕРИЙ СЛУЖИТ

1) для выявления жгутиков по методу Морозова, Леффлера

2) для метода посева на МПА

3) для реакции агглютинации

4) для микроскопии нативного препарата методом «висячая» или «раздавленная» капля

15. КОСВЕННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОДВИЖНОСТИ БАКТЕРИЙ ПРЕДНАЗНАЧЕН

1) для выявления жгутиков по методу Морозова, Леффлера

2) для окраски по методу Грама

3) для микроскопии нативного препарата методом «висячая» или «раздавленная» капля

4) для иммунофлюоресцентного метода

16. ЦВЕТ, В КОТОРЫЙ ОКРАШИВАЮТСЯ ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫЕ МИКРООРГАНИЗМЫ ПО ГРАМУ

1) красный

2) синий

3) желтый

4) оранжевый

17. ЦВЕТ, В КОТОРЫЙ ОКРАШИВАЮТСЯ КИСЛОТОУСОЙЧИВЫЕ МИКРООРГАНИЗМЫ ПО ЦИЛЮ-НИЛЬСЕНУ

1) красный

2) синий

3) желтый

4) зеленый

18. ЦВЕТ, В КОТОРЫЙ ОКРАШИВАЮТСЯ ЗЕРНА ВОЛЮТИНА ПО НЕЙССЕРУ

1) красный

2) синий

3) желтый

4) коричневый

19. ДИФФЕРЕНЦИРОВОЧНЫЙ КОМПОНЕНТ ПРИ ОКРАСКЕ ПО МЕТОДУ ГРАМА

1) генциановый фиолетовый

2) фуксин

3) раствор Люголя

4) вода

5) спирт

20. ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫЕ БАКТЕРИИ ПРИ ОКРАСКЕ ПО ЕРА- МУ ОКРАСИЛИСЬ В СИНИЙ ЦВЕТ. ВОЗМОЖНАЯ ПРИЧИНА ОШИБКИ

1) мазок не обработан раствором Люголя

2) мазок переобесцвечен спиртом

3) мазок недообесцвечен спиртом

4) мазок недоокрашен фуксином

21. ДИФФЕРЕНЦИРОВОЧНЫЙ КОМПОНЕНТ ПРИ ОКРАСКЕ ПО МЕТОДУ ЦИЛЯ-НИЛЬСЕНА

1) кислота

2) физиологический раствор

3) спирт

4) дистиллированная вода

22. ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ КИСЛОТОУСТОЙЧИВЫХ БАКТЕРИЙ ИСПОЛЬЗУЕТСЯ ОКРАСКА

1) по Бурри

2) по Граму

3) по Цилю-Нильсену

4) по Нейссеру

5) по Ожешко

23. ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ СПОР У СПОРООБРАЗУЮЩИХ БАКТЕРИЙ ИСПОЛЬЗУЮТ ОКРАСКУ

1) по Бурри

2) по Граму

3) по Цилю-Нильсену

4) по Нейссеру

5) по Ожешко

24. ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ КАПСУЛ У БАКТЕРИЙ ИСПОЛЬЗУЮТ ОКРАСКУ

1) по Бурри

2) по Граму

3) по Цилю-Нильсену

4) по Нейссеру

5) по Ожешко

25. МЕТОД ВЫЯВЛЕНИЯ НУКЛЕОИД БАКТЕРИЙ

1) по Граму

2) по Пешкову

3) по Романовскому-Гимзе

4) по Здродовскому

26. ОБОЛОЧКУ БАКТЕРИЙ ВЫЯВЛЯЮТ ПО МЕТОДУ

1) Грама

2) Пешкова

3) Романовского-Гимза

4) Бурри-Гинса

27. МЕТОД ВЫЯВЛЕНИЯ КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ БАКТЕРИЙ

1) по Граму

2) по Пешкову

3) по Романовскому-Гимзе

4) по Ожешко

28. МЕТОД ВЫЯВЛЕНИЯ ЗЕРНА ВОЛЮТИНА У БАКТЕРИЙ

1) по Граму

2) по Нейссеру

3) по Ожешко

4) по Цилю-Нильсену

29. ПО МЕТОДУ ОЖЕШКО СПОРЫ БАКТЕРИЙ ОКРАШИВАЮТСЯ В ЦВЕТ

1) синий

2) красный

3) желтый

4) черный

30. ВОЗБУДИТЕЛИ СПИРОХЕТОЗОВ ВЫЯВЛЯЮТ НА ПРЕПАРАТАХ

1) по Ожешко

2) по Граму

3) по методу темного поля

4) по Романовскому-Гимзе

31. РИККЕТСИИ ОКРАШИВАЮТ

1) по Здродовскому

2) по Нейссеру

3) по Ожешко

4) по Граму

32. РИККЕТСИИ ОКРАШИВАЮТСЯ ПО ЗДРОДОВСКОМУ В ЦВЕТ

1) красный

2) желтый

3) зеленый

4) синий

33. ПО СВОИМ БИОЛОГИЧЕСКИМ СВОЙСТВАМ ПРОСТЕЙШИЕ ОТНОСЯТСЯ

1) к эукариотам

2) к прокариотам

3) к прокариотам и эукариотам

4) ни к одной из перечисленных групп

34. ПО СВОИМ БИОЛОГИЧЕСКИМ СВОЙСТВАМ ГРИБЫ ОТНОСЯТСЯ

1) к эукариотам

2) к прокариотам

3) к простейшим

4) ни к одной из перечисленных групп

35. ПО СВОИМ БИОЛОГИЧЕСКИМ СВОЙСТВАМ СПИРОХЕТЫ ОТНОСЯТСЯ

1) к эукариотам

2) к прокариотам

3) ни к одной из перечисленных групп

4) к простейшим

36. ТРОФОЗОИДЫ ПРОСТЕЙШИХ ОКРАШИВАЮТ

1) раствором Люголя

2) по Романовскому-Гимзе

3) по Граму

4) по Ожешко

37. ЦИСТЫ ПРОСТЕЙШИХ ОКРАШИВАЮТ

1) раствором Люголя

2) по Романовскому-Гимзе

3) фуксином

4) тушью

38. ГРИБЫ, КОТОРЫМ ПРИНАДЛЕЖАТ МИЦЕЛИЙ (ПСЕВДОМИЦЕЛИЙ) И ГИФЫ

1) дрожжи и дрожжеподобные

2) лучистые

3) нитчатые

4) все вышеперечисленные

39. МИКРООРГАНИЗМЫ, КОТОРЫМ СВОЙСТВЕННО ПОЧКОВАНИЕ И ЗЕРНА ВОЛЮТИНА

1) дрожжи и дрожжеподобные

2) лучистые

3) нитчатые

4) актиномицеты

ЭТАЛОНЫ ОТВЕТОВ НА ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ

№ вопросаОтвет№ вопросаОтвет№ вопросаОтвет
11144271
22151282
31161292
42171303
55182311
62192321
71204331
81211341
92223352
102236362
111241371
123253381
133262394

СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ

Задача №1. При профилактическом медицинском осмотре был приготовлен микропрепарат со слизистой из влагалища, окрашен метиленовой синью. При микроскопировании в поле зрения: скопление кокков, расположение — внеклеточное. Что позволит отдифференцировать гонококковое инфицирование от стафилококкового?

Ответ: Гонококки располагаются попарно. При затрудненной дифференциации — окрасить микропрепарат по методу Грама. Стафилококк — грамположительный микроорганизм, гонококк — грамотрицательный. Следовательно, в первом случае кокки будут синего цвета, во втором — красного.

Задача №2. Микропрепарат из осадка мочи окрашен по Циль- Нильсену. При микроскопировании в поле зрения: кислотоустойчивые микроорганизмы. Каким образом отдифференцировать М. tuberculosis от M. smagmatis?

Ответ: Окрасить препарат по методу Хузе или по Бунге-Траутенроту. М. tuberculosis — красного цвета, M. smagmatis — синего цвета.

Задача №3. Студент на практическом занятии «взял» у соседа мазок из зева, приготовил микропрепарат, окрасил его по Нейссеру. При микроскопировании обнаружены микроорганизмы рода Соrynebacterium. Каким образом по морфологическим признакам и структуре отдифференцировать дифтероиды от возбудителя дифтерии?

Ответ: Дифференцировку проводят по распожению в пространстве и зернам волютина. У дифтероидов зерна волютина или отсутствуют, или расположены не биполярно: по всему телу палочки, или, с одной стороны.

Задача №4. После операции на тазобедренном суставе у пациента образовался свищ. При микроскопии (простой метод окраски метиленовым синим) отделяемого обнаружены палочки. Какой метод окраски следует предложить, чтобы упростить дальнейшее бактериологическое исследование?

Ответ: Окраска по Граму — для дифференциации грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов.

Задача №5. При профилактическом обследовании медицинского персонала родильного дома на носительство кокковой флоры сделан мазок из зева и окрашен по Граму. При микроскопировании в поле зрения обнаружены грамположительные кокки, составляющие короткие и длинные цепочки. Дальнейшая тактика врача-бактериолога?

Ответ: Выделение чистой культуры с идентификацией вида по схеме выделения стрептококков.

Источник: https://lifelib.info/microbiology/tincture/7.html

Методы приготовления и окрашивания микроскопических препаратов

Окраски спор по ожешко

⇐ Предыдущая12345678910Следующая ⇒

Микроскопический метод исследования предусматривает наблюдение за живыми и убитыми бактериями в окрашенном и неокрашенном состоянии.

С целью изучения формы и подвижности бактерий микроскопию микроорганизмов можно проводить в живом состоянии без окрашивания. Для этого готовят мазки «раздавленная» и «висячая» капля и наблюдают их с помощью темнопольной и фазово-контрастной микроскопии.

Приготовление мазка «раздавленная капля».На предметное стекло по центру наносят каплю или жидкой культуры или физ.раствора, в который вносят исследуемую культуру. Нанесенную на предметное стекло каплю раздавливают с помощью покровного стекла.

Затем на покровное стекло наносим каплю иммерсионного масла и микроскопируем. При фазово-контрастной микроскопии мы будем наблюдать подвижность и форму бактерий темного цвета на светлом фоне.

При темнопольной микроскопии – подвижность и форму бактерий светлого цвета на темном фоне.

Для изучения микроорганизмов в окрашенном виде на предметном стекле делают мазок, высушивают, фиксируют и после этого окрашивают.

Различают простые и сложные способы окраски. Первые основаны на применении какой–либо одной краски (или метиленового синего или фуксина). Сложные методы предусматривают воздействие на один и тот же препарат двух красок. Сложные методы окраски позволяют обнаруживать в теле микробной клетки различные структурные элементы (капсулы, споры, включения).

Предметные и покровные стекла, употребляемые для приготовления препаратов должны быть чистыми и хорошо обезжиренными (с помощью хозяйственного мыла).

Из жидких культур каплю материала наносят на предметное стекло и размазывают петлей. Из культуры на плотной среде петлей берут частичку, размешивают в заранее нанесенной на предметное стекло капле физиологического раствора и размазывают по стеклу.

Мазку дают высохнуть на воздухе, затем его фиксируют над пламенем спиртовки (горелки), держа стекло мазком вверх, и трижды проводят через пламя спиртовки. Время фиксации не должно превышать 5-6с. Кроме жара, для фиксации используют 96 град. спирт, погружая в него мазок на 15-20мин.

После фиксации мазок готов к окрашиванию.

Методика окраски по Граму.Особенностью окраски по Грамму является неодинаковое отношение различных микробов к красителям. Микробы, входящие в группу грамположительных, например стафилококки, стрептококки, дают прочное соединение с красителями и йодом.

Окрашенные микробы не обесцвечиваются при воздействии на них спиртом, вследствие чего при дополнительной окраске фуксином грамположительные микробы не изменяют первоначально принятый фиолетовый цвет. Это объясняется строением клеточной стенки грамположительных бактерий.

Основным компонентом толстой клеточной стенки этих бактерий является многослойный пептидогликан, с которым ковалентно связаны тейхоевые кислоты.

Грамотрицательные бактерии (гонококки, менингококки, возбудители кишечных заболеваний) образуют с генциановым фиололетовым и йодом легко разрушающееся под действием спирта соединение, в результате чего они обесцвечиваются и затем окрашиваются фуксином в красный цвет. Клеточная стенка таких бактерий представлена тонким слоем пептидогликана.

1. На фиксированный мазок наносят раствор генцианового фиолетового на 2мин.

2. Затем сливают краситель и, не промывая мазок, наливают раствор Люголя на 1мин.

3. Сливают раствор Люголя и наносят на 30сек 96 град спирт, пока не перестанет отходить краситель.

4. Мазок промывают дистиллированной водой и окрашивают в течении 2 мин раствором фуксина.

5. После чего сливают краситель, мазок промывают водой и высушивают. Грамположительные бактерии окрашиваются в синий (фиолетовый) цвет, а грамотрицательные бактерии – в красный.

Методика окраски по Бурри-Гинсу.Некоторые виды бактерий продуцируют слизистое вещество, которое концентрируясь вокруг тела микробной клетки, образует капсулу. Данная окраска служит для выявления у бактерий капсул.

1. На середину предметного стекла наносят капельку туши и смешивают ее петлей с каплей культуры.

2. Делают мазок ребром покровного стекла, дают высохнуть и фиксируют над пламенем горелки.

3. Затем промывают дистиллированной водой и красят 5-10 мин фуксином.

4. Затем вновь мазок промывают водой и высушивают. При микроскопии бактерии окрашиваются в красный цвет, фон черный, а капсулы неокрашенные.

Методика окраски по Ожешко.Этот метод служит для выявления у бактерий спор. Споры имеют вид круглых или овальной формы образований, находящихся в теле микробной клетки.

Различают три вида расположения спор по отношению к длинной оси палочки: центральное – спора находится в центре тела микроба, субтерминальное – спора расположена ближе к одному из ее концов, терминальное – спора располагается на конце палочки.

1. На высушенный нефиксированный мазок наливают 0,5% раствор хлористоводородной кислоты и подогревают 1-2мин над пламенем горелки до закипания.

2. Остывший препарат промывают водой, высушивают и фиксируют над пламенем спиртовки.

3. Затем на мазок наносят раствор фуксина Циля и нагревают над пламенем спиртовки до отхождения паров.

4. После того как препарат остынет, обесцвечивают его 5% раствором серной кислоты, промывают водой и докрашивают метиленовым синим в течении 3-5 мин, затем промывают водой и подсушивают. Споры, окрашенные фуксином имеют красный цвет, тело микробной клетки – синий цвет.

Методика окраски по Цилю-Нильсенудля кислотоустойчивых бактерий (возбудители туберкулеза и проказы). Особенностью микробов этой группы является то, что они плохо воспринимают окраску. Для того чтобы окрасить кислотоустойчивые микроорганизмы, приходится применять более концентрированные растворы красителя в подогретом состоянии с протравами и удлиненным сроком окраски.

1. Фиксированный над пламенем спиртовки мазок окрашивают в течение 3-5мин фуксином Циля с подогреванием до появления паров.

2. Дают препарату остыть, промывают водой.

3. Обесцвечивают в течение 3-5 с в 5% растворе серной кислоты.

4. Препарат промывают водой.

5. окрашивают метиленовым синим в течение 3-5 мин.

6. Промывают водой, подсушивают и микроскопируют.

При окраске препаратов по методу Циля-Нильсена кислотоустойчивые бактерии окрашиваются фуксином в рубиново- красный цвет и не обесцвечиваются кислотой. Некислотоустойчивые бактерии, а также элементы ткани и лейкоциты под действием кислоты становятся бесцветными и приобретают цвет дополнительного красителя (синий).

Тесты по теме:

1. Метод окрашивания для выявления капсул:

а) Ожешко

б) Бурри-Гинсу

в) Граму

г) Цилю- Нильсену

д) Нейссеру

2. Метод окрашивания для выявления спор:

а) Ожешко

б) Бурри-Гинсу

в) Граму

г) Цилю- Нильсену

д) Нейссеру

3. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются по методу:

а) Ожешко

б) Бурри-Гинсу

в) Граму

г) Цилю- Нильсену

д) Нейссеру

4. Дифференциально-диагностическая окраска бактерий:

а) Ожешко

б) Бурри-Гинсу

в) Граму

г) Цилю- Нильсену

д) Нейссеру

5. Перечислить грамположительные бактерии:

а) стафилококки, клостридии

б) кишечная палочка, сальмонелла

в) стрептококки, гонококки

6. Перечислить грамотрицательные бактерии:

а) менингококки, гонококки

б) кишечная палочка, стафилококки

в) стрептококки, сальмонеллы

7. Перечислить спорообразующие бактерии:

а) сибирская язва, клостридии

б) пневмококки, стрептококки

в) клебсиелла, стафилококки

8. Перечислить капсулообразующие бактерии:

а) пневмококки, клебсиелла

б) сибирская язва, стрептококки

в) шигеллы, сальмонеллы

⇐ Предыдущая12345678910Следующая ⇒

Дата добавления: 2014-11-10; просмотров: 6077. Нарушение авторских прав

Рекомендуемые страницы:

Источник: https://studopedia.info/1-39956.html

Адвокат 24